Cell Meter Annexin V凋亡檢測試劑盒 綠色熒光 適合流式細(xì)胞檢測 通過對(duì)磷脂酰絲氨酸(PS)進(jìn)行檢測，而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞凋亡的檢測。在凋亡細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）從胞內(nèi)移位到胞外表面，因此PS出現(xiàn)在細(xì)胞的外表面可以作為細(xì)胞凋亡的起始或者中間階段的通用指示器，也可以通過其形態(tài)學(xué)改變來測定。該試劑盒采用獨(dú)有的綠色熒光染料（FITC的優(yōu)越替代物，使用FITC通道檢測）標(biāo)記的Annexin V檢測凋亡細(xì)胞，同時(shí)包含PI紅色熒光染料用于對(duì)壞死細(xì)胞進(jìn)行染色。試劑盒內(nèi)組分經(jīng)過特別優(yōu)化，尤其適合于流式細(xì)胞分析。目前商業(yè)化各種Annexin V凋亡檢測試劑盒一般是將Annexin V進(jìn)行傳統(tǒng)的熒光團(tuán)（FITC、Cy3）標(biāo)記后作為熒光探針，通過檢測細(xì)胞凋亡早期細(xì)胞膜外翻的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS），從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞凋亡的檢測。然而目前的檢測受到熒光顏色、熒光強(qiáng)度和檢測靈敏度等因素的限制。Cell Meter Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit系列產(chǎn)品分別采用了mFluor Violet和iFluor熒光染料，這種染料比傳統(tǒng)的FITC、Cy3等具有更高的熒光強(qiáng)度、更低的熒光背景和更優(yōu)秀的光穩(wěn)定性，因此檢測效果更靈敏穩(wěn)定；而iFluor系列染料在保證上述優(yōu)勢的同時(shí)，均在405nm處激發(fā)，尤其適合用于多色分析。

操作步驟

1.用測試化合物處理細(xì)胞一段時(shí)間（用喜樹堿處理的Jurkat細(xì)胞4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

2.離心細(xì)胞，得到1-5×10⁵個(gè)細(xì)胞/管。

3.將細(xì)胞重懸于200μL測定緩沖液（組分B）中。

4.將2μL膜聯(lián)蛋白V-iFluor 488（組分A）加入細(xì)胞中。

5.可選：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于壞死細(xì)胞。

6.在室溫下孵育30至60分鐘，避光。

7.可選：在使用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞之前，添加200至300μL的測定緩沖液（組分B）以增加體積。

8.使用具有FL1通道的流式細(xì)胞儀（Ex / Em = 490 / 525nm）監(jiān)測膜聯(lián)蛋白V-iFluor 488的熒光強(qiáng)度。當(dāng)?shù)饣ぜ尤爰?xì)胞時(shí)，使用FL2通道測量細(xì)胞活力。